Ожог печени
Способ моделирования ожога печени при лапароскопической холецистэктомии
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОЖОГА ПЕЧЕНИ ПРИ ЛАПАРОСКОПИЧЕСКОЙ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ(71) Заявитель Государственное высшее учебное учреждение Гродненский государственный медицинский университет(73) Патентообладатель Государственное высшее учебное учреждение Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ моделирования ожога печени при лапароскопической холецистэктомии, включающий формирование у экспериментальных животных интраоперационного ожога печени монополярной электрокоагуляцией, отличающийся тем, что ожог наносят на этапе отделения желчного пузыря от ложа и гемостазе ложа монополярной электрокоагуляцией с рабочей частотой, выходной мощностью, площадью электрода, используемыми при лапароскопической холецистэктомии. Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно экспериментальной хирургии и может использоваться для апробирования и оценки эффективности методов лечения и профилактики ожога печени. В настоящее время существует необходимость в макро- и микроскопическом, гистохимическом и клиническом изучении ожога печени монополярной коагуляцией при отделении пузыря от его ложа и гемостазе ложа при лапароскопической холецистэктомии. Это возможно только в эксперименте на животных. Однако применение лапароскопической аппаратуры по своим параметрам на животных невозможно из-за несоответствия размеров. Наиболее близким к заявляемому является способ моделирования повреждения печени электроножом в режиме резания 1. Животным под общим обезболиванием производят краевую резекцию участка печени. Микроскопическое изучение печени производят на 1, 3, 4, 5, 7, 9-12, 18, 24, 30-е сутки после операции. Недостатком известного способа является его неинформативность в отношении изучения ожога печени при лапароскопической холецистэктомии. Задача изобретения - создание информативной модели, позволяющей изучить процессы, происходящие в месте ожога печени при отделении желчного пузыря от ложа и гемостазе ложа при лапароскопической холецистэктомии. Поставленная задача достигается путем удаления желчного пузыря у экспериментального животного монополярной коагуляцией в режиме, применяемом при лапароскопической холецистэктомии. При этом не производится резекция целого участка печени, как в прототипе, что позволяет изучать процессы, происходящие именно в области ложа желчного пузыря, где, как известно, ткань печени имеет структурные отличия от других участков. Кроме того, при удалении желчного пузыря монополярной коагуляцией в режиме, применяемом при ЛХЭ, ожог печени экспериментального животного (кролика) соответствует ожогу, получае 4690 1 мому при проведении ЛХЭ у человека, в то время как в прототипе ожог печени производится в режиме резания, который значительно интенсивнее, и кроме того, в прототипе травма печени получается намного значительнее. Все это позволяет возможным считать предлагаемую модель информативной для изучения процессов, происходящих в месте ожога печени при ЛХЭ. Способ осуществляют следующим образом. Под внутривенным наркозом (Гексенал 50 мг/кг) после премедикации (Димедрол 1- 1 мл внутримышечно) производят верхне-срединную лапаротомию, осуществляют гемостаз. Пузырную артерию и пузырный проток выделяют, лигируют капроном, пересекают. Для этого используют аппарат для высокочастотной хирургии ЭН-53 М. Характеристики используемого режима взяты из паспорта прибора, используемый режим соответствует режиму работы электрохирургического блока фирмы , применяемого в клинике при лапароскопической холецистэктомии. Морфологическое и гистохимическое исследование производят на 3, 5, 7 и 30 сутки в связи с тем, что на 3-и сутки после повреждения печени процессы альтерации достигают максимума за счет того, что к первичной альтерации присоединяется вторичная (ишемия поврежденной зоны и прилежащих участков за счет стазов и тромбозов микрососудистого русла, активация ПОЛ, выход протеолитических ферментов из поврежденных гепатоцитов) на 5-е и 7-е сутки отслеживают динамику репаративных процессов на 30-е сутки отслеживают завершающий этап регенерации поврежденного участка печени. Приводим пример, подтверждающий возможность использования предлагаемого способа. Пример 1. 10 беспородным кроликам (самцам и самкам), сходным по возрасту и весу (средний вес 3600 г) производят открытую холецистэктомию. Выделение желчного пузыря и гемостаз ложа производят аппаратом ЭН 57 М, используемый режим идентичен применяемому при лапароскопической холецистэктомии электрохирургическому блоку. Кроликов выводят из опыта на 3, 5, 7 и 30-е сутки. При макроскопическом исследовании ложе желчного пузыря спаяно со стенкой желудка, 12-перстной кишкой и большим сальником рыхлыми спайками. Участок ожога печени в области ложа желчного пузыря при снятии спаек желтовато-серого цвета,эластичной консистенции, видимая глубина повреждений до 15 мм. Для морфологического и гистохимического исследования забирали кусочки печени из ложа желчного пузыря и интактной печени. При микроскопическом исследовании на 3 сутки капсула печени в области проекции желчного пузыря покрыта фибринозным наложением. В области ожога капсула печени отечна с круглоклеточной умеренно выраженной инфильтрацией. Печеночная ткань в субкапсулярной зоне ложа в состоянии некроза представлена контурами печеночных балок, гепатоциты которых не содержат ядер. Имеются комплексы сохранившихся печеночных клеток по ходу триад и вокруг более крупных желчных протоков. Вдоль границы зоны некроза и печеночной ткани имеется умеренно выраженная круглоклеточная инфильтрация. Гепатоциты, расположенные на границе с зоной некроза, набухшие, часть их не содержит ядер, а другая часть гепатоцитов имеет бледноокрашенные округлые крупные ядра. Цитоплазма печеночных клеток пенистая вакуолизированная. При морфологическом исследовании на 5 сутки процесс претерпевает некоторые качественные изменения, которые выражаются образованием грануляционной ткани, расположенной в области ложа желчного пузыря и на границе зоны некроза с тканью печени. Грануляционная ткань представлена кровеносными капиллярами и клеточными элементами. Отмечается также активация как междольковой, так и внутридольковой соединительной ткани с началом формирования ложных долек печени в области некроза. На 7 сутки регенераторный процесс окончательно не завершен, так как у всех экспериментальных животных наблюдались очаги некроза печеночной ткани, однако грануляционная ткань более зрелая с наличием соединительно-тканных волокон. Таким образом, к 7 дню у экспериментальных животных наблюдается в месте повреждения незаконченный регенераторный процесс по типу субституции. На криостатных срезах проводят гистохимические реакции по выделению активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-Ф) и кислой фосфатазы КФ(Г). Проведенные исследования показали, что активность исследованных ферментов статистически достоверно изменяется в отдельных группах так, уровень СДГ снижается до 68 на 5 сутки по сравнению с интактной печенью, активность ЛДГ составляет на 5 и 7 сутки соответственно 79 и 83 от контроля. Активность Г-6-Ф увеличилась на 7-е сутки и достигает 115 . Активность КФ значительно снижена во всех группах и достигает на 3 сутки 42 , на 5-е - 41 , на 7-е - 70 от контроля. Из вышеизложенного видно, что ожог печени электрокоагуляцией при лапароскопической холецистэктомии изменяет метаболизм гепатоцитов в области оперативного вмешательства и отображает классические фазы воспалительного процесса. Таким образом, предлагаемая модель действительно позволяет изучать процессы, происходящие в месте ожога печени при отделении желчного пузыря от ложа и гемостазе ложа при лапароскопической холецистэктомии. Преимуществом предлагаемого способа по сравнению с прототипом является возможность оценить процессы, происходящие в печени после лапароскопической холецистэктомии. Кроме того, предлагаемый способ позволяет разработать и экспериментально оценить необходимые способы лечения и профилактики. 2 4690 1 Источники информации Галанкин В.Н. и др. Архив патологии. - 1979,5. - С. 49-55. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
<a href="http://bypatents.com/3-4690-sposob-modelirovaniya-ozhoga-pecheni-pri-laparoskopicheskojj-holecistektomii.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ моделирования ожога печени при лапароскопической холецистэктомии</a>
Химический ожог печени - Лечение печени
Какие размеры камней в желчном пузыре необходимы для проведения операции?
Многие годы безуспешно боретесь с БОЛЯМИ в ПЕЧЕНИ?
Глава Института заболеваний печени: «Вы будете поражены, насколько просто можно вылечить печень просто принимая каждый день...
Читать далее »
Желчнокаменная болезнь — заболевание, которое диагностируется почти у каждого пятого пациента. С возрастом вероятность его развития увеличивается на несколько процентов. В основном, страдают от данной патологии женщины. Спровоцировать образование камней в желчном пузыре могут различные факторы, но самыми главными считаются повышенный уровень холестерина (основного компонента желчи), нарушенный отток желчи, ее застой и заражение органа различными инфекциями. Размеры камней для выбора операции в качестве целесообразного способа лечения желчного пузыря должны быть значительными, небольшие образования пытаются удалить консервативным путем.
Если у пациента наблюдается застой желчи на протяжении длительного времени, то происходит выпад природного жирного спирта в осадок. Данная ситуация может спровоцировать образование «песка», который постепенно увеличивается в объеме, объединяется и формирует конкременты.
Камень в размере может достигать нескольких сантиметров и даже занимать всю полость желчного пузыря. При этом пациент начнет отмечать у себя первые признаки желчнокаменной болезни.
Почему образуются?
На формирование камней в желчном пузыре влияет множество факторов, но в большей степени — нарушения в структуре самой желчи, которая состоит из таких компонентов, как:
- билирубин;
- лактат и холевые кислоты;
- природный липофильный спирт;
- микроэлементы, нужные организму для переработки пищи.
Выработкой желчи занимаются печеночные клетки — гепатоциты. В нормальном состоянии она должна быть жидкой. Если происходят какие-либо нарушения, и развивается заболевание, особенно печени, то ее консистенция становится гуще, и начинают образовываться кристаллы. Кристаллизация в желчном пузыре провоцирует образование камней, что приводит к прогрессированию желчнокаменной болезни.
Камень в желчном пузыре может возникнуть в результате действия двух провоцирующих факторов:
- фактор анатомического характера. В данной ситуации камень появляется в детском возрасте или в период полового созревания. Образование может не проявлять себя, но возникают явные признаки, свидетельствующие о развитии ЖКБ. При отсутствии лечения это может привести к негативным последствиям и значительному ухудшению самочувствия. Клинические осложнения: нарушенный метаболизм, застой
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте
Изобретение относится к медицине. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте заключается в нанесении ожога на 10% поверхности кожи животного, заборе крови и определении в гемолизате эритроцитов коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ка. В случае, если значение Ка при ожоге ниже показателя Ка здоровых животных, судят о снижении детоксикационной функции печени. Изобретение позволяет сделать вывод о детоксикационной функции печени. 1 табл.
Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
В качестве прототипа выбран способ оценки функционального состояния печени, заключающийся в определении в крови количества альфа-глобулинов (А), альбуминов (В), бета-глобулинов (С) и определении по формуле диагностического критерия - коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота по формуле: Кфсп=А / (А+В+С) (см. патент РФ №2305844, G01N 33/68, 2007 г.).
Однако известный способ является длительным, субъективным и не дает возможности ранней диагностики снижения детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
Задача предлагаемого изобретения - раннее выявление нарушения детоксикационной функции печени при ожогах.
Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови, в гемолизате эритроцитов измеряют оптическую плотность в течение 1 минуты при длине волны 340 нм и вычисляют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) и, если показатель Ka у крыс с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте осуществляют следующим образом. Исследования выполнены на 15 половозрелых крысах линии Вистар - самцах массой 180 - 200 г. Контрольная группа представлена животными, не подвергшимися ожогу. Животным опытной группы под тиопенталовым наркозом (30 мг/кг массы) наносят ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час после ожога после декапитации собирают вытекающую из шейных сосудов кровь, стабилизируют ее цитратом натрия (3,8%) в соотношении 9:1, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, отделяют плазму от эритроцитов. Эритроцитарную массу промывают в 5 мл физиологического раствора. После осаждения (10 мин при 3000 об/мин) удаляют физиологический раствор с 10-15% поверхностно расположенных эритроцитов. Отмытые эритроциты гемолизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:40. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 сек в течение 1 минуты и определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) по формуле:
, где
3 - объем пробы в кювете в мл;
106 - коэффициент пересчета моль в мкмоль;
60 - 60 секунд;
6,22×106 - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного НАД;
t - время измерения, мин;
ΔE1 - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек.;
ΔE2 - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин;
Ka эритроцитов крови интактных животных принимают за норму, которая составляет 1,70±0,01 мкмоль/мин2. Если показатель Ka у животных с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени при ожогах.
Результаты исследования коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции в гемолизате эритроцитов и печени представлены в таблице.
Таблица | ||||
Коэффициент каталитической эффективности (Ka; мкмоль/мин2) альдегиддегидрогеназной реакции в эритроцитах и печени в норме и при ожоге | ||||
№ животного | Интактные животные | Опытная группа животных, подвергшихся ожогу | ||
Эритроциты | Печень | Эритроциты | Печень | |
1 | 1,65 | 1,98 | 1,38 | 1,23 |
2 | 1,77 | 1,87 | 1,37 | 1,25 |
3 | 1,69 | 1,81 | 1,38 | 1,19 |
4 | 1,71 | 1,86 | 1,35 | 1,15 |
5 | 1,67 | 1,75 | 1,32 | 1,27 |
6 | 1,64 | 1,76 | 1,35 | 1,25 |
7 | 1,76 | 1,78 | 1,34 | 1,30 |
8 | 1,68 | 1,83 | 1,31 | 1,24 |
9 | 1,68 | 1,79 | 1,33 | 1,25 |
10 | 1,60 | 1,71 | 1,34 | 1,19 |
11 | 1,79 | 1,75 | 1,33 | 1,19 |
12 | 1,68 | 1,69 | 1,36 | 1,26 |
13 | 1,67 | 1,78 | 1,37 | 1,19 |
14 | 1,76 | 1,65 | 1,30 | 1,19 |
15 | 1,69 | 1,77 | 1,32 | 1,22 |
M±m | 1,70±0,01 | 1,79±0,02 | 1,34±0,01* | 1,23±0,01* |
Примечание: * - различия достоверны по сравнению с интактными животными (р<0,01) |
Из таблицы видно, что коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka в эритроцитах здоровых крыс составил 1,70±0,01 мкмоль/мин2 и идентичен Ka печени интактных крыс. Ka в печени интактных крыс равен 1,79:1:0,02 мкмоль/мин2. При термической травме коэффициент каталитической эффективности эритроцитов снижен и составил 1,34±0,01 мкмоль/мин2, в печени Ka соответственно тоже понижен и равен 1,23±0,01 мкмоль/мин2. Поэтому на основании изучения коэффициента каталитической эффективности эритроцитов можно судить о коэффициенте каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции и соответственно о детоксикационной функции печени животных.
Пример конкретного выполнения исследования.
Беспородной белой крысе (самец массой 200 г., в таблице №5) наносят под тиопенталовым наркозом ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час собирают кровь из шейных сосудов и готовят гемолизат эритроцитов, 0,05 мл которого помещают в спектрофотометрическую кювету и измеряют величину оптической плотности при длине волны 340 нм (E340) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:
Время | 0 | 15 сек | 30 сек | 45 сек | 1 мин |
E340 | 0,100 | 0,114 | 0,125 | 0,142 | 0,155 |
Рассчитывают величину оптической плотности при 340 нм: ΔE1 - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек, ΔЕ2 - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин.
После этого рассчитывают коэффициент каталитической эффективности альдегид дегидрогеназной реакции по формуле:
Таким образом,
что свидетельствует о снижении детоксикационной функции печени.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте путем исследования крови, отличающийся тем, что в гемолизате эритроцитов определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka, и если значение Ka при ожоге ниже показателя Ka здоровых животных, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.